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本生知識點總結(jié):ELISA實驗前準(zhǔn)備常見問題
更新時間:2025-05-15瀏覽:365次


  以下是ELISA試劑盒實驗前準(zhǔn)備階段的常見問題及解決方案的整理:

  一、試劑盒選擇與保存問題

  試劑盒類型混淆?

  未區(qū)分直接/間接/夾心ELISA試劑盒,導(dǎo)致實驗設(shè)計錯誤。

  解決方案:根據(jù)檢測目標(biāo)(抗原或抗體)選擇匹配的試劑盒類型。

  試劑保存不當(dāng)?

  凍干標(biāo)準(zhǔn)品未在-20℃保存或反復(fù)凍融,導(dǎo)致活性喪失。

  顯色劑未避光保存(如底物溶液變黃提示污染)。


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  二、樣本處理問題

  樣本類型錯誤?

  血清未離心直接使用(需3000rpm離心10分鐘取上清)。

  組織樣本未充分勻漿(建議冰浴中機(jī)械勻漿10秒/次)。

  樣本保存失效?

  反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白降解(建議分裝保存,-80℃可存6個月)。

  細(xì)菌污染(采集時需無菌操作,避免內(nèi)源性酶干擾)。

  三、實驗器材問題

  器材未校準(zhǔn)?

  移液器誤差>5%(需定期校準(zhǔn),加樣時間控制在5分鐘內(nèi))。

  酶標(biāo)板未預(yù)處理(非即用型試劑盒需自行包被,選用ELISA板材)。

  耗材污染?

  使用普通EP管吸附蛋白(推薦硅化EP管減少吸附)。

  洗板機(jī)殘留(手工洗板需垂直拍板,避免交叉污染)。

  四、環(huán)境與操作問題

  溫度控制不足?

  試劑未室溫平衡(需提前20分鐘平衡,避免動力學(xué)差異)。

  孵育溫度波動(需37℃恒溫,水浴需封閉防蒸發(fā))。

  操作不規(guī)范?

  加樣順序混亂(需按說明書順序加樣,保證顯色時間一致)。

  未穿戴防護(hù)裝備(需穿實驗服、戴手套口罩防污染)。

  關(guān)鍵預(yù)防措施

  標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶?:凍干品需冰上溶解,靜置10分鐘輕搖混勻。

  洗滌液配制?:20×濃縮液需1:20稀釋,避免結(jié)晶未溶。

  陰性對照設(shè)置?:避免高濃度樣本污染空白孔。

  通過規(guī)范操作和細(xì)節(jié)控制可顯著提升實驗成功率。

  如需具體問題排查,可結(jié)合實驗步驟對照上述要點。注:以上資料僅供參考。

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